کلون، امتزاج و بیان نوترکیب ناحیه ۴ آنتی ژن حفاظت کننده باسیلوس آنتراسیس با زیرواحد b کلرا توکسین در باکتری اشرشیاکلی

زمینه و هدف: ترکیب یا اتصال ژنتیکی آنتی ژن ها با زیر واحد b کلرا توکسین =cholera toxin b) (ctb پاسخ آنتی بادی موکوسی قوی ای را ایجاد می کند. هدف از این مطالعه اتصال ctb به ژن کد کننده ناحیه 4 آنتی ژن حفاظت کننده (protective antigen domain 4=pad4) به منظور بیان پروتئین کایمریک به عنوان کاندیدا واکسن علیه بیماری سیاه زخم می باشد. روش بررسی: در این تحقیق تجربی آزمایشگاهی واکنش pcr با پرایمرهای اختصاصی برای ژن های ctbو pad4 انجام شد و ژن های تکثیر شده به طور جداگانه در pgem-t easy vector کلون شدند. سپس ژن pad4 به انتهای '3 ژن ctb با روش هضم آنزیمی متصل شد و ژن امتزاج شده ctb-pad4 در pet28a زیر همسانه سازی گردید. سویه bl21 باکتری e.coli توسط وکتور نوترکیب ترانسفورم شد و بیان پروتئین کایمر تحت القای ایزوپروپیل- بتا-d-1-گالاکتوپیرانوزید iptg)) قرار گرفت و به وسیله تکنیک sds.page و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: ژن امتزاج شده ctb-pad4 ساخته شد و با تکنیکpcr و تعیین توالی مورد تأیید قرار گرفت. این ژن در باکتری e.coli سویه bl21در دمای بهینه 37 درجه سانتیگراد بیان گردید و پروتئین کایمر با موفقیت تولید شد. باند مربوط به این پروتئین با تکنیک sds.page و وسترن بلات تأیید گردید. نتیجه گیری: این پروتئین نوترکیب بعد از بررسی ایمنی زایی می تواند به عنوان واکسن زیر واحدی کایمر جدید و موثر علیه باکتری باسیلوس آنتراسیس به صورت خوراکی یا استنشاقی استفاده شود.